FDA Guide to Inspections of Validation of CleaningProcesses

?FDA在檢測(cè)污染物殘留的規(guī)章指南中，已經(jīng)接受了TOC方法。

?PDA技術(shù)報(bào)告29號(hào)和 49號(hào)的附錄提到在新清潔過(guò)程中采用 TOC 方法并取代專(zhuān)屬性方法 

本文件采用的最壞情況方法專(zhuān)注于清潔過(guò)程結(jié)束時(shí)可能存在的殘余物（清潔劑）。但常見(jiàn)的做法是使用工藝中的污漬，或類(lèi)似藥品或感興趣的化合物的替代品。 

 

強(qiáng)烈推薦在清潔驗(yàn)證中采用TOC分析：

?相對(duì)較低的初期投資以及很低的操作和維護(hù)的費(fèi)用

?使用方便，易于培訓(xùn)新使用者

?極高的靈敏度，能夠執(zhí)行低濃度的檢測(cè)，相比于其它的方法成本極低并且能夠檢測(cè)所有含碳類(lèi)的殘留物質(zhì)

?快速的分析時(shí)間。

?干擾極小

?提高設(shè)備周轉(zhuǎn)時(shí)間。

 

第三章TOC分析方法的驗(yàn)證

一、分析方法驗(yàn)證的要求

分析方法學(xué)驗(yàn)證包括線(xiàn)性、檢測(cè)限( MD )、定量限 (COG)、準(zhǔn)確度、精確度以及擦拭回收率。

Refrence:USP<1226>and ICHQ2(R1)
 

 

 

只有在分析方法是可靠的和可重復(fù)的時(shí)，驗(yàn)證才可通過(guò)。

USP<1226>與ICH Q2（R1）闡述了分析方法的驗(yàn)證程序。

 

二、TOC分析方法驗(yàn)證的前提：TOC分析儀的性能確認(rèn)

?分析儀器確認(rèn)是一個(gè)過(guò)程，確保對(duì)特定測(cè)試使用分析方法是能符合目標(biāo)用途的。

?根據(jù)cGMP規(guī)定，“企業(yè)所使用的檢測(cè)方法的準(zhǔn)確度、靈敏度（檢測(cè)限）、專(zhuān)屬性和重現(xiàn)性（精確度）必須確立并有文件證明。”在這種情況下用TOC法進(jìn)行清潔過(guò)程驗(yàn)證的測(cè)試之前，對(duì)分析儀器進(jìn)行嚴(yán)格的確認(rèn)就尤為重要。此方法包括由USP<1058>所建議的安裝確認(rèn)、運(yùn)行確認(rèn)和性能確認(rèn)（IQ/OQ/PQ）。

 

《中國(guó)藥典》（2015版）四部0682制藥用水中總有機(jī)碳測(cè)定法
 

 

 

三、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

要求：響應(yīng)效率應(yīng)為85％～115％。

試劑：

?蔗糖標(biāo)準(zhǔn)溶液（含碳量0.500mg/L）

?1，4-對(duì)苯醌標(biāo)準(zhǔn)溶液（含碳量0.500mg/L）

 

四、分析方法驗(yàn)證的要點(diǎn)

?專(zhuān)屬性（%碳）

?線(xiàn)性度：5點(diǎn)

?范圍：最高和最低之間的濃度覆蓋域

?準(zhǔn)確度：（總有機(jī)碳）

?精確度：%RSD百分標(biāo)準(zhǔn)偏差

?最低檢測(cè)限（LOD）、最低定量限（LOQ）

?可靠性：在不同的使用條件

 

五、TOC方法驗(yàn)證的具體內(nèi)容

?專(zhuān)屬性

專(zhuān)屬性：專(zhuān)屬性是能能非常準(zhǔn)確地確定所存被測(cè)物質(zhì)。ICH Q2（R1）如能對(duì)目標(biāo)物質(zhì)進(jìn)行準(zhǔn)確的定量檢測(cè)，有機(jī)碳，就顯示出這分析方法對(duì)有機(jī)碳具有專(zhuān)屬性。這可通過(guò)檢測(cè)具有代表性的一些有機(jī)——可選一些含有除碳、氫、氧以外元素的有機(jī)物，比如含有氯、硫、氮或磷的有機(jī)物

Example：FDA缺陷例子

“Your firm failed to establish and follow writtenprocedures to assure the cleaning and maintenance of equipment used in themanufacturing of drug products.  Forexample, cleaning validation for the CIP process vessel, which is utilized inthe aseptic formulation of the CIP process vessel, which is utilized in theaseptic formulation of trivalent bulk influenza vaccine… The study did notinclude swab sampling of the product transfer lines.”

貴司未能建立和遵循已寫(xiě)的操作規(guī)程，在藥品制造中確保清潔和維護(hù)設(shè)備。例如，流感疫苗的CIP過(guò)程罐清潔驗(yàn)證未包括對(duì)生產(chǎn)線(xiàn)的棉簽取樣實(shí)驗(yàn)。

 

?線(xiàn)性和范圍

線(xiàn)性：是指測(cè)定結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度呈正比關(guān)系的程度。

范圍：是指能達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線(xiàn)性，測(cè)試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。

?定量檢查應(yīng)至少測(cè)試5個(gè)濃度范圍并且包含清潔的最低限和最高限度。

?線(xiàn)性的相關(guān)系數(shù)應(yīng)不低于0.98%。

?濃度范圍應(yīng)達(dá)到殘留物限度的50%-150%。

?淋洗法和棉簽法用于限度檢查時(shí)不需做線(xiàn)性/范圍驗(yàn)證。

Example：TOC測(cè)量值和目標(biāo)物濃度的相關(guān)性

 

 

 

 

參考文獻(xiàn)：《藥物分析雜志》 2013.33.（3）

?精密度和準(zhǔn)確度

要顯示TOC法的精密度和準(zhǔn)確度，以含10-6碳的標(biāo)準(zhǔn)品溶液連續(xù)檢測(cè)10次。這里選用此碳濃度來(lái)評(píng)估精密度和準(zhǔn)確度是因?yàn)橥ǔ埩粑锏?TOC限度一般為此水平左右。在此 TOC水平，精密度為 1％，準(zhǔn)確度為±5％。

 

?回收率試驗(yàn)

確定合適取樣方法（沖洗方法、擦拭方法、取樣人員的操作培訓(xùn)及檢測(cè)方法）可使污染物/殘留被有效收回，最終為驗(yàn)證方法提供證據(jù)。

通過(guò)回收率試驗(yàn)驗(yàn)證取樣過(guò)程的回收率和重現(xiàn)性。

通常取樣回收率和檢驗(yàn)方法回收率結(jié)合進(jìn)行。

 

?取樣方法
 

?擦拭法回收率

可接受標(biāo)準(zhǔn) 回收率：≥50% 重現(xiàn)性：≤20%

步驟舉例：

1、準(zhǔn)備1塊500 mm ×500 mm的平整光潔的不銹鋼板。

2、在鋼板上用鋼錐劃出400 mm ×400 mm的區(qū)域每隔100 mm劃線(xiàn)形成16塊100 mm ×100mm的方塊。

3、配制濃度為160 mg/L的妥布霉素水溶液定量裝入噴霧器。

4、將約10 mL溶液盡量均勻地噴在400 mm ×400 mm的區(qū)域內(nèi)。

5、根據(jù)實(shí)際噴出的溶液量計(jì)算單位面積上的妥布霉素量約1μg/100mm2。
 

 

6、自然干燥或用電吹風(fēng)溫和地吹干不銹鋼板。

7、用注射用水潤(rùn)濕棉簽按擦拭取樣操作規(guī)程擦拭鋼板每擦一個(gè)方塊，100 cm2換一根棉簽。在鋼板上取均布的8個(gè)方塊。

8、將棉簽分別放入試管中定量加入注射用水10 mL，加塞輕搖試管并放置10 min，使物質(zhì)溶出。然后將溶液稀釋10倍。

9、使用TOC分析儀測(cè)定此清潔驗(yàn)證水樣的TOC值。
 

 

北京鈕因TOC
 

 

10、計(jì)算回收率。

擦拭回收率（%）=0.8914/1×100%=89.1% 帶入校正公式

實(shí)際計(jì)算值
 

 

 

結(jié)論：理想的回收率，說(shuō)明TOC分析方法適合目標(biāo)化合物擦拭法的清潔驗(yàn)證檢測(cè)。

 

?擦拭技術(shù)
 

 

 

 

注意：連貫性，固定的力度、速度和線(xiàn)路。

 

?淋洗法回收率

通常淋洗法限度檢查不需做回收率驗(yàn)證，定量檢查應(yīng)做回收率驗(yàn)證?？梢岳昧芟慈軇_洗已知量（在限度附近）的分析物確定回收率，回收率通常應(yīng)不低于95%。

淋洗法樣品可對(duì)沖洗液直接檢測(cè)，也可對(duì)沖洗液做稀釋后檢測(cè)，無(wú)論直接檢測(cè)還是稀釋檢測(cè)都應(yīng)在接到樣品后首先將樣品同空白溶劑做視覺(jué)檢查確定是否有顏色差異和異物存在，如果有述現(xiàn)象發(fā)生，可直接判定樣品不合格。

 

回收率接受程度
 

 

最低檢測(cè)限（LOD）、最低定量限（LOQ）

 

LOD/LOQ推演法

記錄低濃度純屬標(biāo)樣的實(shí)測(cè)TOC值和標(biāo)準(zhǔn)偏差（用250、500、750ppbTOC的蔗糖）

使用最小二乘線(xiàn)性回歸算法，確定標(biāo)樣的標(biāo)準(zhǔn)差比實(shí)測(cè)濃度的方程；確定Y軸為標(biāo)準(zhǔn)偏差，X軸為深度。

根據(jù)回歸分析確定該行的Y軸截距

Y軸截距代表零分析物濃度時(shí)的標(biāo)準(zhǔn)偽善（Y軸截距＝│S0│）

計(jì)算檢測(cè)限（LOD＝│Y軸截距│×3）

計(jì)算檢測(cè)限（LOQ＝│Y軸截距│×10）

 

參考文獻(xiàn)：Taylor,John K,Quality Assurance of Chemical Measurement(化學(xué)測(cè)量的質(zhì)量保證)  Lewis Publishers imprint of CRC press(1987)

 

六、TOC分析方法的注意點(diǎn)

?最好使用校準(zhǔn)曲線(xiàn)，即TOC和目標(biāo)物濃度的線(xiàn)性相關(guān)性是否良好。因?yàn)槊恳挥袡C(jī)物的氧化效率是不同的。（除非氧化效率高，可以忽略）

?擦拭法需要同時(shí)對(duì)照溶劑（如注射用水）和空白棉簽，即擦拭空白coupons，進(jìn)行TOC分析，來(lái)判定干擾程度。

?必須選擇原理、量程合適的TOC分析儀。因?yàn)榍鍧嶒?yàn)證的水樣與注射用水不同，無(wú)法預(yù)測(cè)水樣的清潔程度。